Аналізи для визначення грипу
Грип, що почався в цьому сезоні, небезпечний серйозними ускладненнями, тому дуже важливо якомога раніше поставити точний діагноз, щоб призначити адекватне лікування. І тим більш важливо відрізнити грип від інших респіраторних інфекцій.
У цьому сезоні основним епідемічний штам є пандемічний вірус грипу А/H1N1pdm09 «свинячого» походження.
Також можливе зараження вірусом грипу B і А/H3N2, а також інфікування одним з 13 збудників ГРВІ, що викликають грипоподібні симптоми.
Кожен з них має свої особливості, і захворювання вимагає індивідуального підходу до лікування. Грип, викликаний вірусом A/H3N2 важко переносять діти до 5 років, літні люди, особи з хронічними захворюваннями бронхо-легеневої та серцево-судинної системи. «Свинячий грип» важко переносять люди середнього віку, частіше з хронічними захворюваннями серцево-судинної системи, ожирінням, цукровим діабетом, бронхіальною астмою і вагітні жінки. При епідемії грипу 2009 року, викликаної «свинячим» штамом А/H1N1pdm09 летальний результат частіше спостерігався у осіб віком від 30 до 67 років, причому в 21% випадків на початку захворювання температура не піднімалася вище 38оС і близько 10% не мали яких-небудь хронічних захворювань.
Інфікування дітей до 2х років респіраторно-синцитіальним вірусом, вірусами парагрипу і бокавирусом може призвести до важких станів, що вимагають госпіталізації — крупу і бронхо-обструктивному синдрому. Респіраторно-синцитіальний вірус, метапневмовирус, віруси грипу, аденовіруси можуть викликати бронхіт і пневмонію переважно у дітей до 5 років.
Яким збудником інфікована людина, може сказати тільки лабораторна діагностика, по клінічній картині, на жаль, це зробити неможливо.
Лабораторний аналіз на визначення грипу та інших збудників респіраторної інфекції дає можливість призначити адекватне лікування, точно визначити прогноз, не допустити характерних для кожного збудника ускладнень і в ряді випадків уникнути необґрунтованої антибіотикотерапії.
Де можна здати аналіз на грип?
Здати аналіз на вірус грипу та інших збудників респіраторних інфекцій можна в Центрі Молекулярної діагностики (CMD) ФБУН ЦНДІ епідеміології Росспоживнагляду. Діагностичні тести дозволяють виявити збудників грипу, ГРВІ, мікоплазмової та хламідійної інфекцій, коклюшу та інших гострих респіраторних захворювань протягом одного дня. Доцільно здавати аналіз на виявлення грипу та збудників ГРВІ при підозрі на вірусну інфекцію в першу — другу добу захворювання, коли збудник міститься в максимальній кількості. Пам’ятайте, що точний діагноз — правильне лікування!
Діагностика грипу та гострих респіраторних вірусних інфекцій в CMD:
- Вірус грипу (Myxovirus influenzae) А і В, якісне визначення РНК, ПЛР
- Вірус грипу (Myxovirus influenzae) А і В/ Вірус парагрипу (Parainfluenzae virus) 1,2,3,4 типів, якісне визначення РНК
- Вірус грипу (Myxovirus influenzae) А, А/Н1N1/СА/2009, В, якісне визначення РНК, ПЛР
- Діагностика ГРВІ. Збудники респіраторних вірусних інфекцій (РНК Respiratory Syncytial virus, РНК Metapneumovirus, РНК Coronavirus, РНК Rhinovirus, ДНК Adenovirus B, C, E, ДНК Bocavirus, РНК Parainfluenza virus 1, 2, 3, 4),якісне визначення,ПЛР
- Збудники респіраторних інфекцій
Як працюють тести
Молекулярно-генетичні методи, зокрема полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), здатні виявити геном збудника в мазку з носоглотки хворого.
ПЛР — швидкий прямий метод діагностики, що виявляє специфічні ділянки геному мікробів, тобто відрізняють їх один від одного. Саме тому метод ПЛР по суті є експрес-аналізом на грип та інші респіраторні інфекції.
ПЛР збільшує в мільярд разів кількість цих ділянок за рахунок роботи ферменту ДНК-полімерази, достраивающего ланцюга ДНК після приєднання до специфічних ділянках коротких молекул олігонуклеотидів — праймерів. В процесі добудовування ланцюгів ДНК відбувається руйнування ДНК-полімеразою міченої флуоресцентними барвниками молекули – олигонуклеотидного зонда, також специфічно отжигающегося на ділянці ДНК шуканого збудника, і перегороджує шлях рухомого ферменту.
Чим більше збудника було в зразку клінічного матеріалу пацієнта, тим раніше прилади фіксуватимуть збільшення над пороговим значенням рівня флуоресценції в процесі реакції. Аналіз проводиться з детекцією в режимі реального часу. Якщо в зразку немає збудника, підвищення рівня флуоресценції не відбувається. У процесі розробки тестів вони обов’язково перевіряються на специфічність, тобто відсутність перехреста з іншими вірусами і бактеріями.
Аналізи на виявлення грипу
Аналіз на грип, проведений при підозрах саме на цю інфекцію, дозволяє поставити остаточний діагноз. Клінічні симптоми дають можливість лише запідозрити грип, але остаточну відповідь – за лабораторією. На сьогоднішній день розроблено безліч аналізів, які підтверджують природу хвороби як опосередковано, так і безпосередньо, причому з високою точністю.
Загальний аналіз крові
Аналіз крові з пальця може дати лікареві багато інформації про природу захворювання, але не покаже наявності саме вірусу грипу. Однак, відомо, що при грипі спостерігаються типові зміни загальної картини крові. У першу добу хвороби аналіз показує підвищений рівень лейкоцитів (лейкоцитоз) з підвищенням рівня паличкоядерних форм, іноді можуть проявитися і незрілі форми клітин — метамієлоцити (юні).
На другу добу відбувається різке зниження лейкоцитів – лейкопенія. Змінюється також і процентне співвідношення лейкоцитів (лейкоцитарна формула). Нейтрофілів в процентному відношенні стає менше, а лімфоцитів — більше. Рівень гемоглобіну і еритроцитів залишається в межах норми, але різко збільшується показник ШОЕ (швидкість осідання еритроцитів).
Біохімічний аналіз крові
При грипі немає особливих, типових змін у цьому аналізі. Іноді може змінюватися співвідношення білкових фракцій, а також підвищується кількість С-реактивного білка, який говорить про наявність запалення в організмі. Самого вірусу грипу цей аналіз також не виявляє.
Специфічні аналізи
Можна провести специфічні дослідження, які підтвердять наявність вірусу. Для цього береться кров на грип з відня. Серологічними методами пределяются антитіла до вірусу, або антигенів вірусу. Підтвердженням зараження вірусом грипу є наростання титру антитіл в 4 рази і більше. Для проведення даного аналізу потрібно значний час, тому даний метод більше підходить для ретроспективної діагностики (у період видужання).
А якщо потрібно отримати підтвердження наявності вірусу швидко, тоді які аналізи здають на грип? Сучасним, швидким і точним є метод ПЛР (полімеразної ланцюгової реакції), який виявляє РНК вірусу. Для проведення аналізу береться мазок з носа і глотки або проба відокремлюваного носоглотки. Метод високо специфічний, не дає помилок, проводиться швидко.
Експрес-методом визначення вірусу грипу є імуноферментний аналіз. Він виявляє наявність вірусу в області верхніх дихальних шляхів. Отримані за допомогою мазка слиз і клітини з носоглотки обробляють особливим реактивом з мітками. Якщо вірус грипу в мазках присутній, утворюються особливі комплекси з мітками, які в ультрафіолетовому світлі дають особливе світіння.
Коли і де?
Далеко не завжди у пацієнтів при підозрі на грип проводиться забір аналізів, особливо специфічних. Зазвичай для підтвердження грипу проводять забір мазків у перших хворих до початку епідемії. Далі діагноз «грип» виставляється за клінічними даними.
Можуть бути призначені аналізи на виявлення грипу при госпіталізації, при загрозі або розвитку ускладнень, для підтвердження саме грипу, як причини ускладнень (або летального результату). За призначенням лікаря ці аналізи виконуються в лабораторії поліклініки, безкоштовно.
Послуги по визначенню грипу за допомогою аналізів пропонують приватні клініки, але ці дослідження коштують досить дорого — зате забір матеріалу може проводитися з виїздом на будинок, що дуже зручно.
Інфекційні хвороби. Національне керівництво. / Під ред. Н.Д. Ющука, Ю. Я. Венгерова. — 2015
ЕФЕКТИВНІСТЬ ФАРМАКОТЕРАПІЇ ГРИПУ ТА ІНШИХ ГРВІ У ПЕРІОД ПАНДЕМІЇ ГРИПУ 2009-2010 РР / Малєєв Ст. Ст., Краснікова Т. В., Кондратьєва Т. В. // Інфекційні хвороби.. — 2010. — Т. 8. № 4.
ПОРІВНЯННЯ ЕПІДЕМІЙ ГРИПУ В РОСІЇ 2009 І 2011 РОКІВ, ВИКЛИКАНИХ ПАНДЕМІЧНИМ ВІРУСОМ ГРИПУ А(H1N1) / Карпова Л. С., Бурцева Е. І., Поповцева Н.М., Столярова Т. П. // Епідеміологія і вакцинопрофілактика.. — 2011. — № 5 (60)
Розробка діагностичної тест-системи на основі «Сандвіч»-іфа для виявлення вірусу грипу А птахів / Жемаева Ст. Л., Козлов А. Ю., Ямникова С. С., Кальнов С. Л., Верховський О. А., Алипер Т. В. // Питання вірусології. — 2009. — Т. 54 №4. — 45 с.
Оцінка ефективності диференціальної діагностики грипу методом мультиплексного ПЛР з детекцією у режимі реального часу / Лободанов С. А., Ніконова А. А., Файзулоев Е. Б., Трушакова С. В., Забіяка Ю. І., Калінкіна М. А., Іванова В. Т., Шевченко Е. С., Звєрєв Ст. Ст., Бурцева Е. І. // Питання вірусології. — 2012. — Т. 57 №1. — с. 42-45
Порівняльний аналіз ефективності швидких тестів в діагностиці грипу А та респіраторно-синцитіальної вірусної інфекції у дітей / Петрова Е. Р., Суховецкая В. Ф., Писарєва М. М., Майорова В. Р., Сверлова М. В., Даниленко Д. М., Петрова П. А., Кривицька В. З., Соминина А. А. // Клінічна лабораторна діагностика. — 2015. — Т. 60 №11. — с. 44-49
У розпал епідемічного сезону дуже актуальне питання діагностики грипу. Це важливо і необхідно для своєчасного лікування захворювання, адже хвороба може призвести до різних серйозних ускладнень. Тому потрібне проведення лабораторних досліджень, включаючи аналіз на грип під час сезонної спалаху захворювання.
Загальний аналіз крові
Для того щоб поставити остаточний діагноз, зазвичай роблять аналіз крові на грип. Терапевт пропонує його у разі припущення цієї інфекції. Клінічні симптоми дають можливість лише запідозрити грип, але тільки лабораторний аналіз дасть остаточну відповідь. Сьогодні медицина пропонує декілька видів аналізів, які можуть визначити природу хвороби з високою точністю.
Терапевт може отримати багато інформації з загального аналізу, але визначити наявність вірусу грипу не вийде. Однак, відомо, що при такому захворюванні з’являються певні зміни загальної картини крові. В перші 24 години після зараження буде підвищений рівень лейкоцитів. На наступний день проявиться різке зниження лейкоцитів.
Змінюється також і лейкоцитарна формула. На тлі того, що лімфоцитів стає більше, кількість нейтрофілів зменшується. Незважаючи на те, що показник гемоглобіну і еритроцитів буде в межах норми, ШОЕ значно підвищиться.
Додаткові аналізи
Поява грипозних або інших вірусних захворювань під час епідемії змушує терапевта провести діагностику. Тому додатково до загального аналізу крові рекомендується провести ще кілька маніпуляцій:
- Біохімічний аналіз крові. При грипі особливих змін спостерігатися в результаті не буде. Підвищення кількості С-реактивного білка вкаже на наявність запального процесу в організмі. Але такий аналіз крові при грипі сам вірус не виявить.
- Специфічний аналіз на вірус грипу. Для його проведення необхідно взяти кров з вени. Таке дослідження підтвердить наявність вірусу. Завдяки серологічному методом можна визначити антигени вірусу. Наростання титру антитіл в 4 рази і більше є підтвердженням зараження грипом. Недоліком цього аналізу є потреба значної кількості часу для отримання результату.
- Імуноферментний аналіз. За допомогою цього експрес-методу можна швидко виявити вірус грипу. Для цього беруть мазки слизу і клітини з носоглотки. Потім отриманий матеріал обробляють особливим реактивом з мітками. Наявність світіння при просвічуванні ультрафіолетовим світлом говорить про присутність вірусу в мазках.
- Метод ПЛР. Він дає можливість швидко отримати підтвердження наявності вірусу. Для аналізу беруть мазки з носа і горла. Недоліком такого методу вважається неможливість визначити, чи живий вірус і відповідно є пацієнт ще заразним для оточуючих.
Такі аналізи зазвичай беруть у пацієнтів під час епідемії або при госпіталізації. Особливо важливо це зробити, якщо є загроза розвитку серйозних ускладнень.
ГРВІ та грип визнані найбільш поширеними захворюваннями верхніх дихальних шляхів інфекційного походження у дітей. Саме аналіз крові у дитини при грипі допомагає підтвердити наявність вірусу в організмі. Своєчасна діагностика дасть можливість уникнути ускладнень або навіть до летального результату у разі важкої форми хвороби.
Вірус грипу вважається одним з найбільш небезпечних вірусів. В холодну пору року його дуже легко підхопити. Враховуючи, що прогноз грипу може бути несприятливим, так як в 10% випадків він переходить в пневмонію, рекомендується своєчасно здавати аналізи.
Цікаве відео
Грип та гострі респіраторні інфекції щорічно залишаються найпоширенішими серед інфекційних хвороб. Для грипу та ГРВІ характерна осінньо-зимово-весняна сезонність. Захворюваність реєструється цілий рік, але епідемії грипу спостерігаються переважно взимку.
Епідемічний сезон починається восени з підйому захворюваності на ГРВІ, пізніше «приходить» грип. У сезоні 2016-2017 року очікується активна циркуляція штаму вірусу грипу А (H3N2) «Гонконг» (так званого «гонконзького» грипу). Збережеться присутність вірусу «свинячого» грипу А (H1N1)pdm2009.
Грип важче протікає у літніх людей, осіб з різними хронічними захворюваннями (захворювання дихальної системи, серцево-судинна патологія, ожиріння, цукровий діабет та ін), вагітних, осіб з імунодефіцитом.
У дітей у віці до 5 років важко протікають і частіше дають ускладнення ГРВІ, викликані респіраторно-синцитіальним вірусом, метапневмовирусом, вірусами парагрипу та аденовіруси.
Тяжкість перебігу грипу та ГРВІ зумовлена небезпекою ускладнень з боку верхніх і нижніх дихальних шляхів (пневмонії, бронхіти, синусити та ін), які можуть загрожувати не тільки здоров’ю, але й життю людини, і часто вимагають термінової госпіталізації.
У кожному конкретному випадку респіраторного захворювання необхідно точно визначити збудника респіраторної інфекції за допомогою лабораторного дослідження. Це дозволяє визначити прогноз, призначити адекватне лікування і не допустити ускладнень, характерних для кожного збудника. Крім того, точна діагностика дозволяє уникнути необґрунтованого призначення антибіотиків.
Послуга «Діагностика вірусних інфекцій дихальних шляхів (грип і ГРВІ)» дозволить в найкоротші терміни виявити віруси грипу А (включаючи штами «свинячого» і «гонконзького» грипу, причому вірус «свинячого» грипу виявляється окремо), віруси грипу В і поширених збудників ГРВІ.
Це важливо, оскільки лікування грипу кардинально відрізняється від лікування інших ГРВІ: використовуються противірусні препарати, ефективні саме відносно вірусів грипу (інгібітори нейрамінідази — озелтамивир, занамівір).
Параметри, що входять до складу дослідження:
- РНК Iv — Influenza virus (віруси грипу А, A/H1N1pdm2009 («свинячий грип») і,
- РНК hRSv — Respiratory Syncytial virus (респіраторно-синцитіальний вірус людини),
- РНК hMpv — Metapneumovirus (метапневмовирус людини),
- РНК hCov — Coronavirus (коронавірус людини),
- РНК hRv — Rhinovirus (риновірус людини),
- ДНК hAdv — Adenovirus B, C, E (аденовірус людини груп B, C і E),
- ДНК hBov — Bocavirus (бокавирус людини),
- РНК hPiv — Parainfluenza virus (віруси парагрипу людини 1, 2, 3 і 4 типів)
Увага! У відповідності з федеральним законом від 21.11.2011 № 323-ФЗ «Про основи охорони здоров’я громадян у Російській Федерації» ПЛР-дослідження є одним з методів всебічного обстеження пацієнта, на підставі яких лікар встановлює діагноз і вибирає заходи з лікування пацієнта.
*Про можливі протипоказання необхідно проконсультуватися з фахівцем.
Показання до призначення дослідження:
- Наявність гостро виникло захворювання з лихоманкою (підйом температури, як правило, 38-39 градусів) і симптомами ураження дихальних шляхів (біль у горлі, кашель та ін) і/або наявності синдрому загальної інтоксикації (озноб, головний біль, біль в очних яблуках, пітливість, «ломота в кістках» та ін). Важливо пам’ятати, що тільки по клінічній картині етіологічний діагноз точно поставити не можна, можна лише говорити про «гриппоподобном захворюванні».
- Диференційна діагностика грипу А (в т. ч. A/H1N1pdm2009, так званого «свинячого» грипу), грипу та інших ГРВІ.
Метод визначення
Полімеразна ланцюгова реакція з детекцією в режимі реального часу (Real-time PCR).
Досліджуваний матеріал
Зішкріб епітеліальних клітин рото – і носоглотки
Визначення РНК вірусу грипу в зіскобі епітеліальних клітин ротоглотки і носоглотки методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) з детекцією в режимі реального часу.
Грип – гостра респіраторна вірусна інфекція, що передається повітряно-крапельним шляхом.
Збудники грипу – РНК-вмісні віруси, які належать до родини Orthomyxoviridae, в якому виділяють три роди: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus.
Віруси грипу А та В щорічно викликають епідемії більшою чи меншою інтенсивністю практично в усіх країнах світу. Віруси грипу А широко поширені в природі, їх виділяють у більшості звірів і птахів, у зв’язку з чим вони мають високий пандемічний потенціал, так як здатні долати міжвидовий бар’єр. Основною причиною виникнення епідемій та пандемій грипу є висока варіабельність вірусу внаслідок змін в його геномі. Це стосується фрагментів, які кодують поверхневі антигени вірусів типів А і В і визначають їх специфічність.
Віруси Influenza А і B вражають переважно верхні відділи дихальних шляхів: ніс, горло, трахею і рідше бронхи. Однак симптоми загальної інтоксикації при грипі домінують над помірними катаральними проявами. Зазвичай захворювання супроводжується різким підвищенням температури, м’язовими і головним болем, сильним нездужанням, сухим кашлем, болем у горлі і слизовими виділеннями з носа. Для грипу, зумовленого новим або значно зміненим вірусом (наприклад, для грипу птахів типу А(H5N1) та А(H7N9), рідше А (H1N1) pdm 2009), характерно гостре, блискавичне початок, розвиток різних варіантів токсикозу (нейротоксикозу, інфекційно-токсичного шоку в поєднанні з гемодинамічними розладами) і III ступеня ДВЗ-синдрому (гемокоагуляционного шоку).
Діагностика інфекції здійснюється комплексно, на підставі анамнестичних даних про контакт з хворими на грип та характерної клінічної картини. Підтвердження діагнозу можлива з допомогою лабораторних досліджень, що доцільно при наявності клінічних проявів грипу в епідемічний сезон зростання захворюваності гострими респіраторними інфекціями, при тяжкому перебігу респіраторних хвороб.
В якості базових тестів можуть бути використані наступні лабораторні дослідження: визначення антигенів вірусу грипу в мазках зі слизової носа і ротоглотки методом непрямої імунофлуоресценції або іммунохроматографії; визначення антитіл до антигенів вірусу грипу А/B в сироватці крові методом ІФА. Результати ІФА, як правило, оцінюються ретроспективно. Внаслідок пізньої діагностики вони не впливають на корекцію терапії, але застосовуються в наукових цілях і для епідеміологічного нагляду та контролю за грипом. Найбільш сучасним методом лабораторної діагностики грипу є виявлення РНК вірусу методом ПЛР.
Максимального рівня специфічності і чутливості досягають тести на основі ПЛР-ВІД (полімеразна ланцюгова реакція зі зворотною транскрипцією) з гібридизаційно-флуоресцентною детекцією продуктів ампліфікації в режимі реального часу, що дозволяють виявляти в біологічному матеріалі РНК збудника інфекції.
Література
- Грип у дорослих. Клінічні рекомендації. МОЗ РФ. 2017:57. http://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/909
- Грип у дітей. Клінічні рекомендації. МОЗ РФ. 2017:43. http://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/172
- Грип у дорослих: методичні рекомендації з діагностики, лікування, специфічної і неспецифічної профілактики. Під ред. академіка, професора А. Р. Чучалина, головного позаштатного інфекціоніста СЗФО проф. Т. В. Сологуб. — СПб.: Видавничо-поліграфічний комплекс «НП-Принт». 2014:192.
- Яцишина С. Б., Творогова М. Р., Шипулін Р. А., Малєєв Ст. Ст. Лабораторна діагностика грипу та інших ГРВІ методом полімеразної ланцюгової реакції. Лабораторна служба. 2017;6(3):238-267. https://doi: 10.17116/labs201763238-267.